DAAPC-Tesis
http://hdl.handle.net/10396/137
2024-03-29T12:49:27ZEvaluación de la exposición a Aflatoxina B1 sobre los parámetros productivos y bioquímicos, y determinación de la curva de excreción de Aflatoxina M1 en leche en ganado caprino
http://hdl.handle.net/10396/25661
Evaluación de la exposición a Aflatoxina B1 sobre los parámetros productivos y bioquímicos, y determinación de la curva de excreción de Aflatoxina M1 en leche en ganado caprino
Mora Medina, Rafael
En los últimos años ha habido una tendencia creciente en la prevalencia de aflatoxinas en las materias primas destinadas a alimentación animal debido, principalmente, al cambio climático. Además, la ingesta de productos lácteos también se ha visto incrementada de manera notable en las últimas décadas. Ambos hechos han provocado una gran preocupación en la comunidad científica debido a la contaminación de la leche poraflatoxina M1. En este contexto, nuestro objetivo ha sido determinar la transferencia de aflatoxina B1 procedente de la dieta como aflatoxina M1 a la leche de cabra. Además, se ha determinado el posible efecto de la aflatoxina B1 sobre los parámetros productivos y bioquímicos en esta especie animal. Para ello, 18 cabras de raza Florida en lactación tardía se dividieron en 3 grupos (n = 6) y fueron expuestas a diferentes dosis diarias de aflatoxina B1 (T1 = 120 μg; T2 = 60 μg y Control = 0 μg) durante 31 días. La aflatoxina B1 pura se administró 6 h antes de cada ordeño mediante un pellet contaminado artificialmente. Las muestras de leche se tomaron individualmente de manera secuencial. La producción de leche y el consumo de alimento se registraron diariamente y se tomó una muestra sanguínea el último día de exposición. No se detectó aflatoxina M1 en las muestras recogidas previamente al comienzo del estudio, ni durante todo el procedimiento en los animales del grupo control. La concentración media de aflatoxina M1 detectada en la leche (T1 = 0.075 μg/kg; T2 = 0.035 μg/kg) aumentó significativamente en relación con la cantidad de aflatoxina B1 ingerida. No obstante, la cantidad de aflatoxina B1 ingerida no tuvo influencia sobre el porcentaje de excreción de aflatoxina M1 (T1 = 0.066% y T2 = 0.060%), siendo este porcentaje considerablemente inferior al descrito en otros estudios científicos en cabras lecheras. De este modo, concluimos que la concentración de aflatoxina M1 en la leche sigue una relación lineal respecto a la aflatoxina B1 ingerida, y que el porcentaje de excreción no se ve afectado aunque los animales sean expuestos a diferentes dosis de aflatoxina B1. Por otro lado, se determinó que los parámetros productivos tras la exposición crónica a aflatoxina B1 no se ven afectados, revelando cierta resistencia a los efectos tóxicos de este compuesto en las cabras.; In the past few years there has been a growing tren in the prevalence of aflatoxins, attributable to climate change, in substances destined for animal feeding, together with an increase in dairy product consumption. These facts have triggered great concern in the scientific community over milk pollution by aflatoxin M1. Therefore, our study aimed to determine the transfer of aflatoxin B1 from the diet into milk as AFM1 in goats exposed to different concentrations of AFB1, and its possible effect on the production and serological parameters of this species. For this purpose, 18 Florida goats in late lactation were divided into 3 groups (n = 6) and exposed to different daily doses of aflatoxin B1 (T1 = 120 μg; T2 = 60 μg, and control = 0 μg), during 31 d. Pure aflatoxin B1 was administered 6 h before each milking in an artificially contaminated pellet. The milk samples were taken individually in sequential samples. Milk yield and feed intake were recorded daily, and a blood sample was extracted on the last day of exposure. No aflatoxin M1 was detected, either in the samples taken before the first administration, or in the control group ones. The aflatoxin M1 concentration detected in the milk (T1 = 0.075 μg/kg; T2 = 0.035 μg/kg) increased significantly on a par with the amount of aflatoxin B1 ingested. The amount of aflatoxin B1 ingested did not have any influence on aflatoxin M1 carryover (T1 = 0.066% and T2 = 0.060%), these being considerably lower than those described in dairy goats. Thus, we concluded that the concentration of aflatoxin M1 in milk follows a linear relationship with respect to the aflatoxin B1 ingested, and that the aflatoxin M1 carryover was not affected by the administration of different aflatoxin B1 doses. Similarly, no significant changes in the production parameters after chronic exposure to aflatoxin B1 were observed, revealing a certain resistance of the goat to the possible effects of that aflatoxin.
2023-01-01T00:00:00ZRegulation of the host immune response by PRRSV-1 strains of different virulence
http://hdl.handle.net/10396/24934
Regulation of the host immune response by PRRSV-1 strains of different virulence
Ruedas-Torres, I.
Forty years after its appearance, Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) continues being a major hazard for the economy of the porcine sector, due to the lack of fully effective tools for its diagnosis and control. This scenario, together with the re-emergence of virulent strains, has increased the interest of the scientific community in the study of the immunopathogenesis of the plethora of PRRSV strains. Virulent PRRSV strains cause more severe signs and more striking lesions, together with high viraemia and viral loads in different organs as well as an aberrant and erratic immune response. Recently, in 2018, the established genetic and antigenic differences between the former European genotype or PRRSV-1 and the American genotype or PRRSV-2 have led to classify them into two different viral species Betaarterivirus suid 1 (for PRRSV-1) and Betaarterivirus suid 2 (for PRRSV-2). One of the main characteristics of PRRSV, regardless of its virulence, is its ability to modulate the host immune response, facilitating viral distribution, replication and latency in the body. The following doctoral thesis entitled “Regulation of the host immune response by PRRSV-1 strains of different virulence” delves into until know underexplored processes modulated during the early stage of infection with PRRSV in target organs of infected piglets, carrying out a comparative study between two PRRSV-1 strains of different virulence, the low virulent 3249 strain and the virulent Lena strain. The thymus, as the source of development and maturation of T lymphocytes, has a key role in the proper establishment of the immune response. Of note, thymic atrophy is one of the characteristic lesions of PRRSV, especially described in animals infected by virulent strains of the virus. In this sense, the induction of cell death phenomena such as apoptosis has been one of the postulated mechanisms able to induce this thymic atrophy during PRRSV infection, modulating the host immune response. Thus, the objective of the first work of this doctoral thesis was the assessment of the lesional picture and the evaluation of the cell death phenomena in the thymus of infected piglets with the two strains of the virus above mentioned. Animals infected with the virulent Lena strain showed evident thymus atrophy in comparison with thymi from animals of either control or 3249-infected groups. This increase in the degree of injury in the animals infected with the virulent strain was related to a rise in the viral load and the expression of nucleocapsid protein (N protein) of the virus in this organ. Thymi from animals infected with 3249 strain, on the contrary, exhibited a mild to moderate degree of injury with lower levels of N protein and PRRSV viral load in the thymus. Additionally, in the thymus from animals infected with Lena strain, an increase in the expression of the generic marker of cell death TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick-end labeling) and the protein cleaved caspase-3 (cCasp3), an executioner caspase in which converge extrinsic and intrinsic pathways of apoptosis, were observed by immunohistochemical labelling, coinciding with the enhancement in the severity of the lesion. In the thymus from both infected groups, a greater induction of the extrinsic pathway of apoptosis was observed, evidenced by an increase in the cleaved caspase-8 (cCasp8) and fas cell death receptor (Fas) proteins. This increase in cell death phenomena, especially in Lena strain-infected animals, may cause a lower number of viable and mature T lymphocytes and, consequently, an impairment in the host immune response. This finding helps to explain, at least in part, the increase in fever and the greater clinical signs, such as apathy, lethargy, anorexia, and respiratory signs, as well as the greater intensity of the lesions, for instance, suppurative bronchopneumonia, observed in these animals. In addition to induction of apoptosis in the thymus, improper T lymphocytes activation also constitutes a mechanism for modulating the immune response during infection with PRRSV. During antigen presentation by antigen-presenting cells (APCs) to T lymphocytes, the interplay of certain stimulatory and inhibitory signals, among others, is required. Under physiological conditions, inhibitory signals act as a brake for the immune system, modulating the inflammatory response and inducing immunotolerance. However, in pathological situations, such as cancer or chronic infections, these molecules, known as immune checkpoints, act as an escape mechanism, causing inadequate T-cell activation. In addition, some of these molecules may also affect T-cell development in the thymus as well as the activation and proliferation of T-cells in target organs and secondary lymphoid organs. Under this context, the second and third studies of this doctoral thesis aimed to evaluate the expression as well as the role of immune checkpoints in target organs (thymus, lung and tracheobronchial lymph node) of pigs infected with the two PRRSV-1 strains of different virulence. In the second study, focused on the thymus, several coinhibitory immune checkpoints [programmed cell death/programmed death-ligand 1 (PD1/PDL1), cytotoxic T-Lymphocyte antigen-4 (CTLA4), T-cell immunoglobulin domain and mucin domain 3 (TIM3), lymphocyte activating 3 (LAG3), CD200 receptor 1 (CD200R1) and indoleamine 2,3-dioxygenase 1 (IDO1)], related to the development and maturation of T lymphocytes, were evaluated using real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and immunohistochemistry. The results showed an overexpression of the immune checkpoints PDL1, CTLA4, TIM3, LAG3 and IDO1, especially in the thymus of Lena-infected piglets, from the first week post-infection. The co-expression of these molecules may affect T lymphocytes development, maturation, and selection in the thymus and, in addition, in our study was associated with disease progression and apoptosis phenomena in infected pigs. The third study, focused on the lung and the tracheobronchial lymph node, comprised both coinhibitory [CTLA4, T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains (TIGIT), PD1/PDL1, TIM3, LAG3 and IDO1] and costimulatory [CD28, CD226, tumour necrosis receptor superfamily member 9 (TNFRSF9), L-selectin (SELL or CD62L), inducible T-cell costimulator (ICOS) and CD40] immune checkpoints. Our results highlighted a mild increase of costimulatory molecules together with an earlier and stronger upregulation of coinhibitory molecules in target organs from PRRSV-1 infected animals, especially in the lung from virulent Lena strain. Simultaneous expression of coinhibitory immune checkpoints suggests a synergistic effect of these molecules most probably oriented to control the exacerbated inflammatory response during the early stage of PRRSV infection. In addition, the sustained expression of some immune checkpoints, particularly during late stages of PRRSV infection, might also impact the activation and proliferation of T cells impairing the onset of an efficient host immune response. During the process of antigen presentation and polarisation of T lymphocytes, they undergo a series of divisions and differentiations that will give rise to effector T lymphocytes, capable of producing specific cytokines and inducing cytolytic activity by proteins such as Fas/FasL. This event is determined by the action of different transcription factors (TFs), proteins that regulate cellular gene expression. Thus, the expression of the TF T-box transcription factor 21 (T-bet) will result in a polarisation towards a Th1 type response, forkhead box P3 (FOXP3) in a differentiation towards a regulatory response by regulatory T lymphocytes (Tregs), GATA binding protein 3 (GATA3) will be related to Th2 response and the TF eomesodermin (EOMES) will lead towards a cytotoxic response in charge of CD4 cytotoxic T lymphocytes (CTLs). Despite the importance of TFs in the onset of the adaptive immune response, their study in the context of PRRSV infection is scarce. Therefore, the third objective of this doctoral thesis was to evaluate the expression by qRT-PCR of different TFs (T-bet, GATA3, FOXP3 and EOMES) as well as the expression of the different effector cytokines [interferon gamma (IFNG), tumour necrosis factor alpha (TNFA) and interleukin (IL)-10 (IL10)] and FASL in target organs (lung, tracheobronchial lymph node and thymus) of pigs infected with two PRRSV-1 strains of different virulence. Organs from animals belonging to both infected groups, but especially those infected with Lena strain, showed an overexpression of the TFs T-bet, EOMES and FOXP3 together with an increase in the cytokine IFNG at the end of the study. These results show a polarisation of T cells towards a response of Th1 type, Tregs and CD4 CTLs, particularly after infection with the virulent Lena strain. Altogether, this doctoral thesis analyses different mechanisms which underlie PRRSV immunopathogenesis and serves as a basis for future functional studies addressed to better understand the disease.; Cuarenta años después de su aparición, el Virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino (PRRSV, del inglés Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus) sigue siendo uno de los agentes patógenes con mayor repercusión económica en el sector porcino, debido a la falta de herramientas totalmente eficaces para su diagnóstico y control. Esto unido a la reemergencia de cepas virulentas ha aumentado el interés por parte de la comunidad científica en el estudio de la inmunopatogenia de las diferentes cepas del virus. Las cepas virulentas del PRRSV producen una sintomatología y lesiones más graves que las cepas clásicas o de baja virulencia, y se asocian con una elevada carga viral tanto en suero como en tejidos. Además, la respuesta inmune frente a la enfermedad es aberrante y errática. Debido a sus diferencias biológicas y a su aislamiento en los dos continentes, a principios de los 90 se designaron dos genotipos distintos del virus, genotipo europeo o PRRSV-1 y genotipo americano o PRRSV-2. Recientemente, en 2018, las diferencias genéticas y antigénicas estudiadas han permitido clasificarlo en dos especies víricas distintas Betaarterivirus suid 1 (o PRRSV-1) y Betaarterivirus suid 2 (o PRRSV-2). Una de las principales características de este virus, independientemente de su virulencia, es su capacidad para modular la respuesta inmune del hospedador. Así pues, el PRRSV, es capaz de regular diversos procesos biológicos del sistema inmune para favorecer su distribución, replicación y latencia en el organismo. En la siguiente tesis doctoral titulada “Regulación de la respuesta inmune en cepas de distinta virulencia del PRRSV-1” se profundiza en procesos pobremente estudiados que pueden ser modulados durante la etapa temprana de la infección con PRRSV en órganos diana de lechones infectados, realizándose un estudio comparativo entre dos cepas de distinta virulencia del PRRSV-1, una de baja virulencia, cepa 3249, y otra de elevada virulencia, cepa Lena. El timo es un órgano linfoide primario de importancia crucial en el correcto desarrollo de la respuesta inmune ya que es el órgano donde se produce el desarrollo y maduración de los linfocitos T. La atrofia tímica es una de las lesiones características del PRRSV, especialmente descrita en los animales infectados por cepas virulentas del virus. En este sentido, la inducción de los fenómenos de muerte celular como la apoptosis ha sido uno de los mecanismos postulados como causante de la atrofia tímica durante la infección por este virus, con una repercusión especial en la modulación de la respuesta inmune del hospedador. El objetivo del primer trabajo de esta tesis doctoral fue la valoración del cuadro lesional del timo de lechones infectados con las dos cepas anteriormente mencionadas del PRRSV-1, así como la evaluación de los fenómenos de muerte celular en los mismos. Los animales infectados con la cepa virulenta Lena mostraron una evidente atrofia del timo en comparación con los timos de los animales del grupo control y del grupo infectado con la cepa 3249 de baja virulencia. Este aumento en el grado de lesión de los animales infectados con la cepa virulenta se relacionaba con un aumento de la carga viral y de la expresión de la proteína N (proteína de la nucleocápside) del virus. El timo de los animales infectados con la cepa 3249, por el contrario, presentaron un grado de lesión leve a moderado con niveles más bajos de proteína N y carga viral de PRRSV en el timo. En el timo de los animales infectados con la cepa Lena se observó mediante inmunomarcaje un aumento del marcador genérico de muerte celular TUNEL (del inglés terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick-end labeling), así como un aumento de la proteína caspasa-3 activa (cCasp3, del inglés cleaved caspase-3), caspasa ejecutora en la que convergen las vías extrínseca e intrínseca de la apoptosis, que coincidía con el aumento del grado de lesión. En el timo de ambos grupos infectados se observó una mayor inducción de la vía extrínseca de la apoptosis, dado el aumento de la proteína caspasa-8 activa (cCasp8, del inglés cleaved caspase-8) y el receptor de muerte celular Fas (del inglés fas cell death receptor). Este incremento de los fenómenos de muerte celular, especialmente en los animales infectados con la cepa Lena, provocaría un menor número de linfocitos T viables y maduros y como consecuencia un deterioro en la respuesta inmune del hospedador. Este hallazgo ayuda a explicar el aumento de la fiebre y de signos clínicos más marcados (apatía, letargia, anorexia y signos respiratorios, entre otros), así como la mayor intensidad de las lesiones (por ejemplo, bronconeumonía supurativa) observadas en los animales infectados con la cepa virulenta Lena. Además de una inducción de la apoptosis en el timo, una incorrecta activación de los linfocitos T constituye también un mecanismo de modulación de la respuesta inmune durante la infección con PRRSV. Durante la presentación antigénica por parte de las células presentadoras de antígeno (APCs, del inglés antigen presenting cells) a los linfocitos T se requiere, entre otros, la interacción de ciertas señales estimuladoras e inhibidoras. En condiciones fisiológicas estas señales actúan como freno para el sistema inmune, modulando la respuesta inflamatoria e induciendo inmunotolerancia. Sin embargo, en situaciones patológicas como el cáncer o infecciones crónicas, estas moléculas conocidas como “puntos de control inmunitario” (o immune checkpoints en inglés) actúan como mecanismo de escape, provocando una incorrecta activación de los linfocitos T. Además, algunas de estas moléculas también interfieren durante el desarrollo de esta población en el timo. Bajo este contexto, el segundo y tercer trabajo de esta tesis doctoral tienen el objetivo de evaluar la expresión, así como el papel que podrían estar jugando los immune checkpoints en órganos diana (timo, pulmón y nódulo linfático traqueobronquial) de cerdos infectados con dos cepas de PRRSV-1 de diferente virulencia. En el segundo trabajo, centrado en el timo, se evaluaron varios immune checkpoints inhibitorios [PD1/PDL1 (del inglés programmed cell death/ programmed death-ligand 1), CTLA4 (del inglés cytotoxic T-lymphocyte Antigen-4), TIM3 (del inglés T-cell immunoglobulin domain and mucin domain 3), LAG3 (del inglés lymphocyte activating 3), CD200R1 (del inglés CD200 receptor 1) e IDO1 (del inglés indoleamine 2,3-dioxygenase 1)] mediante RT-PCR cuantitativa (RT-qPCR, del inglés qRT-PCR, real-time quantitative PCR) e inmunohistoquímica, que podrían estar afectando al desarrollo y maduración de los linfocitos T. Los resultados mostraron una sobreexpresión de los immune checkpoints PDL1, CTLA4, TIM3, LAG3 e IDO1 sobre todo en el timo de los lechones infectados con la cepa virulenta Lena desde la primera semana post-infección. La co-expresión de estas moléculas afecta al desarrollo, maduración y selección de los linfocitos T en el timo, lo que se asoció con una progresión de la enfermedad en los cerdos infectados y con los fenómenos de apoptosis en el órgano. El tercer estudio, se centró en el pulmón y en el nódulo linfático traqueobronquial y se evaluaron tanto immune checkpoints coestimulatorios [CD28, CD226, TNFRSF9 (del inglés tumour necrosis receptor superfamily member 9), SELL (del inglés l-sectin o CD62L), ICOS (del inglés inducible T-cell costimulator) y CD40] como coinhibitorios [(CTLA4, TIGIT (del inglés T cell immunoreceptor with Ig and IMIT domains), PD1/PDL1, TIM3, LAG3 e IDO1)]. Nuestros resultados mostraron un leve aumento de moléculas coestimuladoras junto con una temprana e intensa sobreexpresión de moléculas coinhibitorias en órganos diana de animales infectados con ambas cepas del PRRSV-1, especialmente en el pulmón de los animales infectados con la cepa virulenta Lena. La co-expresión de distintos immune checkpoints coinhibitorios sugiere un efecto sinérgico de estas moléculas orientadas probablemente a controlar la respuesta inflamatoria exacerbada durante la etapa temprana de la infección con PRRSV. Además, la expresión mantenida de algunos immune checkpoints, en particular durante etapas más tardías de la infección por PRRSV, también podría afectar a la activación y proliferación de linfocitos T, lo cual afecta al inicio de una respuesta inmune eficaz por parte del hospedador. Durante la presentación antigénica, los linfocitos T sufren una serie de divisiones y diferenciaciones que darán lugar a linfocitos T efectores, capaces de producir citoquinas específicas y de inducir actividad citolítica a cargo de proteínas como Fas/ FasL. Este acontecimiento viene determinado por la acción de diferentes factores de transcripción (FTs), proteínas que regulan la expresión de genes en las células. Así la expresión del FT T-bet (del inglés t-box transcription factor 21) resultará en una diferenciación hacia una respuesta de tipo Th1, la expresión del FT FOXP3 (del inglés forkhead box P3 gene) en una diferenciación hacia respuesta reguladora a cargo de las células T reguladoras (Tregs, del inglés regulatory T cells), el FT GATA3 (del inglés GATA binding protein 3) en una polarización de tipo Th2 y el FT EOMES (del inglés eomesodermin) hacia una respuesta citotóxica a cargo de linfocitos T citotóxicos CD4 (CTLs, del inglés cytotoxic T lymphocytes). A pesar de la importancia de los FTs en el inicio de la respuesta inmune adaptativa, su estudio en el contexto de la infección por PRRSV es escaso. Por tanto, el tercer objetivo de la presente tesis doctoral fue evaluar la expresión mediante RT-qPCR de diferentes FTs (T-bet, GATA3, FOXP3 y EOMES) así como la expresión de las diferentes citoquinas efectoras [IFNG (del inglés interferon gamma), TNFA (del inglés tumour necrosis factor alpha) e IL10 (del inglés interleukin 10)] y FASL en órganos diana (pulmón, nódulo linfático traqueobronquial y timo) de cerdos infectados con dos cepas de PRRSV-1 de distinta virulencia. Los órganos de los animales pertenecientes a los dos grupos infectados, pero especialmente de aquellos infectados con la cepa virulenta Lena, mostraron una sobreexpresión de los FTs T-bet, EOMES y FOXP3 junto con un incremento de la citoquina IFNG al final de estudio. Estos resultados muestran una polarización de las células T hacia una respuesta de las células de tipo Th1, Tregs y CD4 CTLs particularmente en respuesta de la cepa virulenta Lena. En resumen, esta tesis doctoral analiza diferentes mecanismos que hay detrás de la inmunopatogenia del PRRSV y sirve de base para futuros estudios funcionales dirigidos a aumentar el conocimiento de la enfermedad.
2023-01-01T00:00:00ZEvaluación de la toxicidad del Bisfenol A sobre la reproducción y el desarrollo del pez cebra (Danio rerio) como modelo experimental
http://hdl.handle.net/10396/23659
Evaluación de la toxicidad del Bisfenol A sobre la reproducción y el desarrollo del pez cebra (Danio rerio) como modelo experimental
Gonçalves Reis, Lilian de Paula
El bisfenol A es una sustancia química utilizada habitualmente en la fabricación de productos de plástico. Su inhalación o ingestión a partir de partículas en suspensión, agua y/o alimentos contaminados puede desencadenar efectos tóxicos relacionados con la disrupción endocrina, dando lugar a alteraciones hormonales, reproductivas en humanos y animales. El pez cebra (Danio rerio) es un modelo experimental ideal para los estudios de toxicidad (en adultos y embriones), por la facilidad de mantenimiento y capacidad reproductiva. El objetivo principal de este trabajo fue evaluar los efectos tóxicos del Bisfenol A sobre la reproducción y el desarrollo embrionario en una generación tras la exposición de los peces adultos, y de forma complementaria, se hizo previamente la estandarización de los parámetros de calidad de agua de los acuarios, así como de la capacidad reproductiva de los peces. Fueron utilizados un total de 80 peces cebra, machos y hembras, divididos en cuatro grupos por duplicado (n = 20) fueron expuestos a concentraciones de BPA de 500, 50 y 5 μg. L-1, junto con un grupo de control. Los peces se mantuvieron en acuarios de reproducción durante 21 días, donde se observó la fecundidad y la fertilidad. Los embriones obtenidos en los cruces se incubaron en un medio sin Bisfenol A y se evaluaron posibles indicadores de embriotoxicidad. Fue realizado el estudio histopatológico de las gónadas de los peces adultos y la cuantificación de la concentración de Bisfenol A en el homogeneizado del cuerpo. La fecundidad de los peces adultos tras la exposición a 500 μg. L-1 de Bisfenol A, ha disminuido significativamente. Los embriones provenientes de tales reproductores fueron los que presentaron con mayor frecuencia signos de embriotoxicidad, como mortalidad y malformaciones cardíacas y musculoesqueléticas. Las concentraciones de Bisfenol A encontrada en el homogeneizado de cuerpo de los peces, fue proporcional a la concentración a que fueron expuestos. En los estudios histopatológicos de los individuos adultos expuestos a la sustancia, se encontraron alteraciones en la maduración de los ovocitos y en la formación de los espermatozoides. Dichas alteraciones se relacionaron directamente con la acción del Bisfenol A, afectando a la fecundidad, fertilidad en ambos sexos, así como a la viabilidad de su descendencia, de forma proporcional a los niveles de Bisfenol A a los que estuvieron expuestos, por lo que nuestros resultados aportan más información al asociar los efectos tóxicos en la reproducción de los peces adultos y sobre la descendencia, lo que puede, consecuentemente, afectar las siguientes generaciones.; Bisphenol A is a chemical commonly used in the manufacture of plastic products. Its inhalation or ingestion from particulate suspension, contaminated water and/or food can trigger toxic effects related to endocrine disruption, leading to hormonal and reproductive alterations in humans and animals. The zebrafish (Danio rerio) is an ideal experimental model for toxicity studies (in adults and embryos), due to its ease of maintenance and reproductive capacity. The main objective of this work was to evaluate the toxic effects of Bisphenol A on reproduction and embryonic development in one generation after exposure of adult fish, and in a complementary way, the standardisation of the water quality parameters of the aquariums, as well as the reproductive capacity of the fish, was previously carried out. A total of 80 zebrafish, males and females, divided into four groups in duplicate (n = 20) were exposed to BPA concentrations of 500, 50, and 5 μg. L−1, along with a control group. The fish were kept in reproduction aquariums for 21 days, where fecundity and fertility were observed. The embryos obtained in the crosses were incubated in a BPA-free medium and observed for signs of embryotoxicity. A histopathological study (under optical and electron microscopes) was performed of adult fish gonads and quantification of Bisphenol A concentration in the body homogenate were performed. The fecundity of adult fish after exposure to 500 μg. L-1 of Bisphenol A significantly decreased. Embryos from such broodstock showed the most frequent signs of embryotoxicity, such as mortality and cardiac and musculoskeletal malformations. The concentrations of Bisphenol A found in the body homogenate of the fish were proportional to the concentration to which they were exposed. In the histopathological studies of adult individuals, alterations were found in ovocyte maturation and in spermatazoid formation in the groups exposed to the chemical. Those alterations were directly related to BPA action, affecting fecundity, fertility in both sexes, as well as the viability of their offspring, proportionally to the BPA levels to which they were exposed, so that our results provide more information by associating the toxic effects on the reproduction of adult fish and on the offspring, which may consequently affect the next generation.
2022-01-01T00:00:00ZEstudio multidisciplinar de la deformación del borde dorsal del cuello en équidos en Andalucía y Extremadura
http://hdl.handle.net/10396/22926
Estudio multidisciplinar de la deformación del borde dorsal del cuello en équidos en Andalucía y Extremadura
Morales-Briceño, A.
La deformación del borde dorsal del cuello coloquialmente llamada “cuello de gato”, “cuello vencido” es definida como un defecto caracterizado por el incremento de tamaño, peso y volumen de la región dorsal del cuello, asociada a la deposición de grasa y su caída lateral derecha o izquierda, es un grave problema que afecta a la industria ecuestre en España, especialmente Andalucía y Extremadura con grandes pérdidas económicas anuales. Esta situación del équido con la deformación del borde dorsal del cuello representa un gran desafío diagnóstico ya que limita su estudio desde su identificación, inspección hasta la toma de muestras para identificar la causa o posibles causas. Por esto se desarrollaron estrategias en la identificación de équidos con esta condición directamente en algunas yeguadas de Pura Raza (Española, Lusitano, Hispano-Árabe), cruzados en explotaciones medianas y grandes, y por último en mataderos industriales de équidos en Andalucía y Extremadura, acompañado de factores ambientales y de manejo. El objetivo fue un estudio multidisciplinar de la deformación del borde dorsal del cuello en équidos en Andalucía y Extremadura. Se estudiaron de manera multidisciplinaria (epidemiológica, clínica, morfológica, patológica citología, biopsia, histopatologica, inmunohistoquimica, morfométrica, necropsia y bromatológica) a un total de 4.651 caballos (Eqqus caballus), en las Comunidades de Andalucía 51 % y Extremadura 49 %. También se evaluaron 853 burros (Eqqus africanus asinus), en Andalucía 45 % y en Extremadura 54 %. En el estudio se consideró la alimentación, tipo de manejo, actividad física y localización geográfica. La deformación del borde dorsal del cuello en caballos presentó una incidencia general del 9 %, una incidencia de 73 % en la Comunidad Autónoma de Andalucía, el 67 % fueron machos y el 33 % hembras 33 %, mientras que en Extremadura una incidencia de 27 %, el 73 % fueron machos y el 27 % hembras. Se observó en orden de relevancia en caballos Pura Raza Española 55 % con una edad media de 10 años, en cruzados 19 %, a partir de los 10 años, en Hispano-Árabe 14 % a partir de los 14 años y Lusitanos 12 % a partir de los 15 años. La raza, la edad y las medidas del cuello, influyen directamente sobre el grado de deformidad del cuello en los caballos estudiados. La deformación del borde dorsal del cuello en burros presentó una incidencia de 40 %, que resultó ser de mayor en burros de raza Andaluza (70 %), raza Miniatura (14 %), en Zamorano-Leonesa (9 %) y en la raza Catalana (7 %). La edad media de presentación de la deformidad del borde dorsal del cuello en burros fue de 16 años. Se observó mayor incidencia en burros en Extremadura (56 %) que en Andalucía (44 %). Las condiciones de manejo pueden influir en la presentación de la deformación del borde dorsal del cuello en burros, se considera como un factor predisponente, con una relación entre la altura de los comederos y el desarrollo de la deformación del cuello. La alimentación a base de pienso (alimento concentrado), influye directamente sobre la presentación del borde dorsal del cuello en el caballo y en burros. La asociación entre la alimentación a base de alimento concentrado (pienso comercial), caballos estabulados durante periodos prolongados, altura de los comederos en los establos (entre 100-160 cm. de altitud) y baja intensidad del ejercicio son determinantes para la deformación del borde dorsal del cuello en caballos y burros de Andalucía y Extremadura. La depreciación del caballo de Pura Raza Española con deformación del borde dorsal del cuello, estimada para un año, es bastante alta y proporcional al costo del caballo por la pérdida total; solo se compensa el valor obtenido por su venta en matadero que representa el 0,01 % de su costo, sin tomar en cuenta el costo de mantenimiento anual. El 28 % de caballos presentó alguna alteración clínica, mientras que un 72 % no presentaron lesiones al examen clínico. La casuística con mayor incidencia fue la clasificada como patologías del sistema locomotor 69 %, las patologías del sistema digestivo representan un 20 %, las patologías endocrinas representaron un 11 % de los casos estudiados. En los caballos estudiados la deformación del cuello no estaba relacionada con alguna de las principales patologías que afectan al caballo en el sistema locomotor, digestivo y endocrino. En burros con deformación del cuello las patologías más frecuentes fueron del sistema locomotor (cojeras, heridas, osteoartrosis, traumatismos, afecciones del casco excluyendo laminitis) con un 60%, seguida de patologías del sistema digestivo 26 % y por último las patologías endocrinas 14 %. La deformidad del borde dorsal del cuello en los burros estudiados estaba relacionada con alguna de las principales patologías del sistema locomotor, digestivo y endocrino (Correlación positiva entre grado de deformidad y patología). La deformación del borde dorsal del cuello en los équidos estudiados es una condición patológica caracterizada por lipomatosis, que requiere un estudio exhaustivo utilizando herramientas de diagnóstico disponibles, seguras y métodos efectivos para el diagnóstico. Este estudio describe los patrones de reconocimiento citológico, histopatológico y morfométricos del équido con deformación del borde dorsal del cuello en Andalucía y Extremadura. Los resultados del estudio histopatológico, tinción especial e inmunohistoquímico indican que el 68% de los burros presentaban deformación del borde dorsal del cuello y obesidad, mientras 66 % de los caballos presentaron deformación del borde dorsal del cuello y el 44 % de caballos maduros Hispano-Árabe, Cruzado, Lusitano, y Raza Pura Española en Andalucía y Extremadura, con sobrepeso, y obesidad, la raza, el género y el ejercicio son factores de riesgo estadísticamente significativos para el desarrollo de la deformación del borde dorsal del cuello y obesidad en caballos maduros. Adicionalmente los niveles de tocoferol (Alfa-tocoferol, Delta-tocoferol y Gammatocoferol), están estrechamente correlacionados con el grado de deformidad y pueden ser útiles como parámetros indicadores de la deformación del borde dorsal del cuello en équidos. La deformación del borde dorsal del cuello, cresta del cuello o “cuello de gato” está asociada a cambios degenerativos caracterizados por infiltración de grasa denominada lipomatosis, que implica subcutis, ligamento nucal, músculo espinal y músculos multífido. La revisión de la literatura sugiere una estrecha relación entre el desarrollo de la deformación del borde dorsal del cuello en el caballo y el síndrome metabólico equino, existe un nivel moderado de heredabilidad, asociada con el sexo, la edad, el color del pelaje y el lugar geográfico en caballos Pura Raza Española.; The deformation of the dorsal neck colloquially called "cresty neck", is defined as a defect characterized by the increase in size, weight and volume of the dorsal region of the neck, associated with the deposition of fat and its lateral fall right or left, is a serious problem that affects the equestrian industry in Spain, especially Andalusia and Extremadura with large annual economic losses. This situation of the equines with the deformation of the dorsal edge of the neck represents a great diagnostic challenge since it limits its study from identification, inspection to sampling to identify the cause or possible causes. For this reason, strategies were developed in the identification of equines with this condition directly in some farms of Spanish Pure Breed (Spanish, Lusitano, Hispano-Arab), crossed in medium and large farms, and finally in equine slaughterhouses in Andalusia and Extremadura, accompanied by environmental and management factors. The objective was a multidisciplinary study of the deformation of the dorsal edge of the neck in equines in Andalusia and Extremadura. A total of 4,651 horses (Eqqus caballus), in the Andalusia (51 %) and Extremadura (49 %) were studied in a multidisciplinary (epidemiological, clinical, morphological, pathological, cytological, biopsy, histopathological, immunohistochemical, morphometric, necropsy and bromatological). 853 donkeys (Eqqus africanus asinus) from Andalucía (45 %) and Extremadura (54 %) were also evaluated. The study considered food, type of management, physical activity and geographic location. The deformation of the dorsal neck in horses had an incidence of presented a general incidence of 9%, an incidence of 73 % in the Autonomous Community of Andalucía, 67% were males and 33 % females 33 %, while in Extremadura an incidence of 27 %, 73 % were males and the 27 % females. It was observed in order of relevance in Spanish Pure Breed horses 55 % with an average age of 10 years old, in crusaders 19 %, from the age of 10, in Hispano-Arab 14 % from the age of 14 and Lusitanos 12 % from the age of 15. The race, age and neck measurements directly influence the degree of deformity of the neck in the horses studied. The deformation of the dorsal edge of the neck in donkeys had an incidence of 40 %, which turned out to be of greater in donkeys of Andalucía breed (70 %), miniature breed (14 %), in Zamorano-Leonesa (9 %) and in the Catalan race (7 %). The average age of presentation of the deformity of the dorsal neck in donkeys was 16 years. Highest incidence of donkeys was observed in Extremadura (56%) than in Andalusia (44 %). Driving conditions can influence the presentation of cresty neck deformation in donkeys, it is considered as a risk factor, with a relationship between feeder height and the development of neck deformation. Feed with concentrated food directly influences the presentation of the dorsal neck on the horse and donkeys. The association between concentrated food feed, stable horses for extended periods, height of feeders in stables (between 100-160 cm. altitude) and low intensity of exercise are decisive for the deformation of the dorsal neck in horses and donkeys of Andalucía and Extremadura. The depreciation of the Spanish Pure Breed horse with deformation of the dorsal neck, estimated for one year, is quite high and proportional to the cost of the horse for the total loss; only the value obtained from its slaughterhouse sale representing 0.01 % of its cost is offset, regardless of the annual maintenance cost. 28 % of horses suffering cresty neck had any clinical alterations, while 72 % had no clinical examination injuries. The most common concurrent pathologies are those of the locomotive system 69 %, follow by pathologies of the digestive system (20 %) while the endocrine pathologies accounted for 11 % of the cases studied. In the horses studied the neck deformation was not related to any of the main pathologies that affect the horse in the locomotive, digestive and endocrine system. In donkeys with neck deformation the most common pathologies were those of the locomotive system (limping, wounds, osteoartthritis, trauma, helmet conditions excluding laminitis) with 60%, followed by pathologies of the digestive system 26% and finally endocrine pathologies 14 %. By contrast with horses, the deformity of the dorsal edge of the neck in the donkeys studied was related to some of the main pathologies of the locomotive, digestive and endocrine system (positive correlation between degree of deformity and pathology). The dorsal neck deformation of the neck in the equine studied is a pathological condition characterized by lipomatosis, which requires a thorough study using available diagnostic tools, safe and effective methods for diagnosis. This study describes the patterns of cytological, histopathological and morphometric recognition of equines with deformation of the dorsal edge of the neck in Andalusia and Extremadura. The results of the histopathological, special staining and immunohistochemical study indicate that 68% of donkeys had dorsal neck deformation and obesity, while 66 % of horses had deformation of neck and 44% of mature horses Hispanic-Arab, Crusader, Lusitane, and Spanish Pure Race in Andalucía and Extremadura. Overweight and obese, race, gender and exercise are statistically significant risk factors for the development of dorsal Edge deformation and obesity in mature horses. In addition, the tocopherol levels (Alpha-tocopherol, Delta-tocopherol and Gamma-tocopherol) are closely correlated with the degree of deformity and can be useful as indicator parameters of the deformation of the cresty neck in horses and donkeys. The deformation of the dorsal neck, cresty neck or "cat neck" is associated with degenerative changes characterized by fat infiltration called lipomatosis, which involves subcutis, nuchal ligament, spinal muscle and multifid muscles. The revision of the literature suggests a close relationship between the development of the deformation of the dorsal neck in the horse and equine metabolic syndrome, there is a moderate level of inheritable, associated with sex, age, hair color and geographical place in Spanish Pure Breed horses.
2022-01-01T00:00:00Z