Evaluación de la transmisión del tomato yellow leaf curl virus (TYLCV-MId) en hospederas alternas cultivadas y silvestres mediante el biotipo B de mosca blanca (Bemisia tabaci (Gennadius)) (Hemiptera: Aleyrodidae)

Abstract

Durante marzo 2008 - noviembre 2009, se realizaron cuatro trabajos de investigación, el primero consistió en los análisis moleculares de muestras de tomate colectadas entre los años 2000 y 2009 provenientes de un inventario nacional de begomovirus. La extracción de ADN viral se hizo utilizando el protocolo de Gilbertson et al. (1991); para la amplificación del ADN a través de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se utilizaron los siguientes pares de cebadores: AV494 - AC1048, PAL1v1978 - PAR1c715 y KL04-06CPF - KL04-07CPR. Las secuencias de nucleótidos de los productos de PCR fueron identificadas por electroforesis capilar, y analizadas por el programa DNAMAN (versión 5.0) y comparadas con la base de datos de genes del Centro Nacional para Información de Biotecnología (NCBI) mediante el programa BLAST 2.0. En el segundo trabajo se realizaron ensayos de transmisión experimental de Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV-Mld) mediante Bemisia tabaci a especies de plantas de crecimiento espontaneo y una solanácea cultivada para evaluarlas como hospederas de dicho virus. Se expusieron individualmente a adultos virulíferos de B. tabaci, especies de plantas comunes en Venezuela: Amaranthaceae: Amaranthus dubius; Capparidaceae: Cleome spinosa, Malvaceae: Sida aggregata Presl., Merremia aegyptia (L), Euphorbiaceae: Euphorbia hirta; Solanaceae: Solanum americanum; S. pimpinellifolium, Datura stramonium y las cultivadas, Capsicum annuum y S. lycopersicum. Esta última fue utilizado como control susceptible a TYLCV. Para el control negativo se utilizaron plantas de las mismas especies, expuestas a adultos de B. tabaci criados sobre plantas de algodón sin begomovirus. Se hicieron observaciones diarias para detectar síntomas hasta 30 días post-período de exposición al vector tanto en aquellas plantas infectadas con moscas virulíferas como en aquellas inoculadas con moscas libres de virus. En aquellas especies donde se detectó el virus, se realizó la retransmisión hacia tomate. Se tomaron muestras de ápices foliares para determinar la presencia de virus. En el tercer estudio se realizaron dos ensayos para evaluar el comportamiento ante dos begomovirus (TYLCV-Mld y un begomovirus bipartito relacionado con el Tomato Venezuela Virus (ToVEV)), de genotipos de tomate mejorados para resistir a TYLCV. En el primer ensayo se utilizaron las variedades Hazera: Helena (HA-3228) y Cecile (HA-3229), el cultivar Río Grande fue el testigo susceptible. En el segundo se evaluaron: variedad Río Grande (VRG), híbrido Río Grande (HRG), híbrido Río Orinoco (HRO), variedad Cherry (VCh), El Cid, Shirly (HA-3331), ShanTY (HA-3371) y Tres (HA- 3359), los cuatro últimos mejorados para resistir a TYLCV. Finalmente, se realizó un ensayo de campo para aproximar cómo evoluciona una epifitia de begomovirus en una siembra de tomate con plantas provenientes de semilleros con y sin protección...

During March 2008 - November 2009, four research works were carried out, the first consisted of molecular analysis of tomato samples collected between the years 2000 and 2009 from a national inventory of begomovirus. Viral DNA extraction was done using the protocol of Gilbertson et al. (1991); the following pairs of primers were used for amplification of DNA by the polymerase chain reaction: AV494 - AC1048, PAL1v1978 - PAR1c715 and KL04-06CPF - KL04-07CPR. Sequences of nucleotides of the PCR products were identified by capillary electrophoresis and analyzed using the program DNAMAN (version 5.0) and compared with nucleotide sequences available in the database of the National Center for Biotechnology Information (NCBI) using the BLAST 2.0 program. In the second work, trials of experimental transmission of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV-Mld) by Bemisia tabaci to spontaneously growing plants species and a cultivated species were conducted to evaluate them as host of the virus. Plants were individually exposed to adult viruliferos of B. tabaci. Species evaluated were common plants in Venezuela: weeds such as Amaranthaceae: Amaranthus dubius; Capparidaceae: Cleome spinosa, Malvaceae: Sida aggregata Presl., Merremia aegyptia (L), Euphorbiaceae: Euphorbia hirta; Solanaceae: Solanum americanum; S. pimpinellifolium, Datura stramonium and cultivated plants such as Capsicum annuum and S. lycopersicum. This latter was used as control of susceptible species to TYLCV. Plants of the same species, exposed to adults of B. tabaci reared on cotton plants without begomovirus were used as negative control. Daily observations were made to detect symptoms up to 30 days post-exposure period to the vector. In those species where the virus was detected, transmission experiments to tomato were conducted. Leaf apices were sampled for analysis of the presence of viruses. In the third study two trials were conducted to evaluate the behavior to two begomoviruses (TYLCV-Mld and a bipartite begomoviruses related Tomato Venezuela Virus (ToVEV)), of tomato genotypes improved to TYLCV resistance. Hazera varieties were used in first trial: Helena (HA-3228) and Cecile (HA-3229), the cultivar Rio Grande was the susceptible control. In second trial cultivars assessed were: variety Rio Grande (VRG), hybrid Rio Grande (HRG), hybrid Rio Orinoco (HRO), variety Cherry (VCh), El Cid, Shirly (HA- 3331), ShanTY (HA-3371) and Tres (HA-3359), the last four improved for resistance to TYLCV. Finally, a field trial was conducted to evaluate the evolution of an epidemic of begomovirus in a crop of tomato from seedlings with and without protection. Treatments: 1. protected seedling production (SP); 2. SP with some plants infected with TYLCV-Mld, 3. Seedling production without protection (SSP) in the plant technical unit (UTF), 4. SPP in a farm and 5. SPP in a trading company. The seeds used were HRG, the first four seedlings treatments were planted in the UTF and the last in the company. Infections,...