Selección de genes de referencia y análisis de expresión diferencial en semen equino criopreservado
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Author
Pérez Rico, Almudena
Director/es
Vega-Pla, J.L.Crespo Castejón, Francisco
Publisher
Universidad de Córdoba, UCOPressDate
2015Subject
ÉquidosCriopreservación
Bancos de germoplasma
Calidad seminal
METS:
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La creación de bancos de germoplasma es una necesidad para realizar planes más
dinámicos de selección de reproductores, siendo necesario abordar los estudios de calidad
seminal desde diferentes puntos de vista. Un criterio de calidad seminal puede basarse en
las diferencias de transcripción de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la
maduración espermática, que afectan a características seminales tan importantes como la
motilidad progresiva y la fragmentación del ADN espermático. El espermatozoide maduro
no tienen función de transcripción porque carece de ribosomas, a excepción de los
intramitocondriales, y hace pensar que la pequeña cantidad de ARN que persiste en estas
células es un reflejo de lo ocurrido en las etapas anteriores, lo que nos puede dar mucha
información sobre alteraciones durante la espermatogénesis o marcadores de calidad
seminal antes de una evaluación in vivo, además estos ARN pueden tener trascendencia en
los inicios de la expresión del óvulo fecundado. Por otro lado, es importante poder trabajar
con semen congelado, pues no siempre los sementales son accesibles para una extracción
de semen fresco. Como primer paso en los estudios de expresión genética, es necesario
definir genes de referencia estables. En este trabajo se analizan nueve genes candidatos,
beta-actina (ACTB), ATP sintasa subunidad b (ATP5B), gliceraldehído-3-fosfato
deshidrogenasa (GAPDH), proteína de choque térmico (HSP90), histona subunidad 2AI
(H2AI), protamina 1 (PRM1) proteína ribosomal L32 (RPL32), succinato deshidrogenasa
(SDHA) y ubiquitina (UBQ). Los genes RPL32, ACTB y ATP5b exhiben el mejor
comportamiento y estabilidad, por lo que son los genes de referencia más adecuados para
usar en estudios con espermatozoides vivos post-descongelación en équidos.
Además, se ha detectado la existencia de relaciones entre los diferentes genes
estudiados con parámetros de calidad seminal. El gen SDHA está infraexpresado en
espermatozoides con baja motilidad progresiva; el gen UBQ está sobreexpresado en
espermatozoides con peor movimiento de linealidad y rectitud; el gen PRM1 está
infraexpresado en espermatozoides con alta fragmentación a las 0 y 4 horas
postdescongelación; y el gen GAPDH está infraexpresado en espermatozoides con alta
fragmentación a las 0 y 6 horas postdescongelación.