Estudios de los mecanismos de inmunomodulación por Fasciola hepática: Apoptosis y linfocitos T reguladores
Study of the mechanisms of immunomodulation used by Fasciola hepatica: Apoptosis and regulatory T cells
Autor
Escamilla, Alejandro
Director/es
Pérez Arévalo, JoséBautista Pérez, María José
Molina, V.
Editor
Universidad de Córdoba, UCOPressFecha
2017Materia
OvejasCabras
Fasciolosis
Fasciola hepatica
Inmunomodulación
Inmunología veterinaria
Linfocitos T
Apoptosis
Anatomía patológica veterinaria
METS:
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La fasciolosis causada por Fasciola hepatica es una enfermedad económicamente muy
importante en rumiantes en climas templados. F. hepatica ha desarrollado una amplia
variedad de mecanismos para munomodular o suprimir la respuesta inmune del
hospedador haciéndola inefectiva, esto permite la supervivencia del parásito durante
años. Esto constituye un serio obstáculo para la creación de vacunas protectoras en
rumiantes. El conocimiento de los mecanismos de inmunomodulación llevados a cabo
por F. hepatica para evadir la respuesta inmunitaria del hospdador es crucial para
mejorar el diseño de vacunas.
En infecciones por helmintos, los eosinófilos juegan un importante papel tanto en el
desarrollo de la patología como en la defensa del hospedador. La apoptosis de estas
células efectoras ha sido descrita como uno de los principales mecanismos de
inmunosupresión o evasión durante las infecciones por helmintos. Existen trabajos que
sugieren que los productos de excreción y secreción de F. hepatica inducen la apoptosis
de los eosinófilos y de macrófagos peritoneales in vitro, así en los infiltrados
inflamatorios en ratas in vivo. El empleo de anticuerpos anti-caspasa 3 es un método
fácil, reproducible y sencillo para estudiar la presencia de apoptosis. El primer objetivo
de este estudio, incluido en el Primer Trabajo fue demostrar la existencia de este
fenómeno, como método de evasión de la respuesta inmunitaria del hospedador en
ovejas infectadas con F. hepatica, in vivo.En el Segundo Trabajo el objetivo fue el estudio de la apoptosis de los leucocitos
peritoneales en ovejas infectadas experimentalmente con F. hepatica durante la fase
migratoria peritoneal en el hospedador. Fueron empleados cinco grupos, (n=5). El grupo
1 fue usado como control no infectado (control negativo), mientras que los grupos 2-5
fueron infectados oralmente con 200 mtc y sacrificados a los 1, 3, 9 y 18 dpi,
respectivamente. El fenómeno de la apoptosis fue detectado mediante el empleo de tres
métodos diferentes: 1) inmunocitoquímica empleando un anticuerpo policlonal anticaspasa-
3 activa; 2) ensayo de citometría de flujo usando Anexina V-FITC/ yoduro de
propidio; y 3) microscopía electrónica de transmisión (TEM). El
objetivo del Tercer Trabajo de la presente Tesis Doctoral fue evaluar la presencia y
distribución de linfocitos T reguladores en el hígado y en los nódulos linfáticos en
ovejas y cabras infectadas con F. hepatica durante las fases agudas y crónicas de la
infección. Fasciolosis caused by Fasciola hepatica is an economically important disease of
ruminants in temperate climates. F. hepatica has developed a variety of mechanisms to
modulate or suppress the host response making it ineffective, which allows the parasite
to survive in the host for years. The parasite host immune response modulation is a
serious obstacle for developing protective vaccines for ruminants. The knowledge of the
immunomodulation mechanisms carried out by F. hepatica to avoid the host immune
response is a key to improve the vaccines development.
In helminth infections, eosinophils play important roles both in developing tissue
pathology and in the host effector response. Apoptosis of effector cells such as
eosinophils and macrophages may play a role in the host immune evasion/suppression
induced by helminth infection. Studies in the rat model have demonstrated that secreted
excretory products of F. hepatica (FhESP) are able to induce apoptosis in eosinophils
and peritoneal macrophages -in vitro- and in the inflammatory infiltrate - in vivo-,
suggesting that apoptosis of effector cells may play a role in the host immune
evasion/suppression induced by F. hepatica infection. The use of activated caspasa 3
antibodies is an easy, reliable and sensitive method to study the presence of apoptosis in
tissue sections. The aim of this study, included in the First Work of this Thesis was to
identify and quantify apoptosis of eosinophils in the hepatic inflammatory infiltrates of
sheep challenged with F. hepatica during the migratory and biliary stages of infection. The aim of the Second Work was to evaluate the presence and number of inflammatory
peritoneal leucocytes undergoing apoptosis in peritoneal fluid from sheep
experimentally infected with F. hepatica during the peritoneal migratory stages in the
host. Twenty five- merino sheep were used. They were divided into five groups (n=5):
Group 1 was used as an uninfected control group (UC) and groups 2–5 were orally
infected with one dose of 200 F. hepatica metacercariae and sheep from these groups
were sacrificed by an intravenous injection of thiobarbital at 1, 3, 9, and 18 dpi,
respectively. Apoptosis was detected using three different methods: 1)
immunocytochemistry (ICC) with a polyclonal antibody anti-active caspase-3; 2) Flow
cytometry assay using the Annexin V-FITC/propidium iodide (PI) kit; and 3)
transmission electron microscopy (TEM). The aim of the Third Work of this Thesis
was to evaluate the presence of Foxp3+ Tregs in liver and hepatic lymph nodes (HLN)
from experimentally infected sheep and goats during acute and chronic stages of
infection.