Influence of the in vitro bovine oocytes maturation conditions on fertilization rates

Abstract

The influenceof maturation medium, serum and hormonal supplements, type of bovine oocyte, as well as the co-culture with granulosa cells for in vitro bovine oocytes maturation on the in vitro fertilization rate were investigated. Immature oocytes with cumulus cells were cultured with two different maturation media (M-199 and DM EM; Experiment 1). In Experiment 2, in vitro maturation was performed with two serum supplements and one hormonal supplement (FCS. ECS and PMSG+HCG). In Experiment 3. on vitro maturation was performed with two different bovine oocyte types (CEO and CDC) In Experiment 4. in vitro maturation was performed with or without the addition of granulosa cells. After in vitro oocyte maturation, oocytes were fertilized using frozen-thawed semen which was previously capacitated with bovine serum albumin and heparin for 15 minutes. The M-199 showed a fertilization rate higher (55 percent; p<0.01) than those obtained in DM EM (39 percent; Experiment 1) . In Experiment 2, the serum and hormonal supplements showed in vitro fertilization rates higher (FCS:55 percent, ECS:57 percent, PMSG + hCG: 60 percent, p<0.001) than that in control group (31 percent). In Experiment 3, In virro fertilization rate of cumulus-denuded oocytes (30 percent) was lower (p<0.001) than those of cumulus-enclosed oocytes (60 percent). In Experiment 4. oocytes cocultured with granulosa cells had higher rates of fertilization (70 percent. p<0.05) than oocytes matured without co-cultured with granulosa cells (55 percent). The results indicate that the use of M-199 medium, the addition of serum or hormonal supplements, the oocyte type and the co-culture with granulosa cells during in vitro maturation influenced the fertilizability of in vitro matured oocytes.

Se investigó la influencia del med¡o de maduración, los suplementos séricos y hormonales, tipo de ovocito bovino. así como el co-cultivo con células de la granulosa durante la maduración oocitaria in vitro sobre los índices de fertilización in vitro de ovocitos bovinos. Ovocitos inmaduros con células del cúmulo se cultivados en dos medios de maduración diferentes (M-199 y DM EM; experimento 1). En el experimento 2, la maduración in vitro se realizó utilizando dos suplementos séricos y uno hormonal (FCS, ECS y PMSG+HCG). En el experimento 3, la maduración se realizó utilizando dos tipos de ovocitos diferentes (CEOy CDO). Y en el experimento 4, la maduración in vitro se llevó a cabo con o sin la adición de células de la granulosa. Después de la maduración de los ovocitos se procedió a su fecundación in vitro utilizando semen descongelado que fue capacitado previamente con suero albuminoso de bovino y heparina durante 15 minutos. El medio M-199 mostró un Indice de fecundación superior (55 p.100; p<0,01) que aquel obtenido por el medio DMEM (39p.100; experimento 1). En el experimento 2, los suplementos séricos y hormonales mostraron un índice de fecundación superior (FCS:55 p.100, ECS:57 p.100, PMSG+HCG:60 p.100; p<0,001) al del grupo control (31 p.100). En el experimento 3, el indice de fecundación in vitro de los ovocitos desnudos fue más bajo (30 p.100; p<0,001) que aquellos obtenidos por los ovocitos cubiertos por células del cúmulo (60 p.100). En el experimento 4, ovocitos co-cultivados con células de la granulosa tuvieron índices de fecundación superiores (70 p.100; p<0,05) que los ovocitos madurados sin co-cultivarse con células de la granulosa (55 p.100). Los resultados indican que el uso del medio M-199, la adición de suero o suplementos hormonales, el tipo de ovocito y el co-cultivo con células de la granulosa durante la maduración in vitro influyen en la capacidad de fecundación de ovocitos madurados in vitro.