La desregulación de la maquinaria de splicing está directamente asociada con la agresividad del cáncer de próstata

Abstract

La desregulación de la expresión de variantes de splicing se ha postulado recientemente como una nueva huella molecular del cáncer. Así, aunque la aparición de variantes de splicing aberrantes (p.ej.: AR-v7, sst5TMD4, etc.) se ha asociado a un incremento de la agresividad del cáncer de próstata (CaP) y/o al desarrollo del cáncer de próstata resistente a la castración (CPRC), hasta la fecha no se ha explorado si el mecanismo molecular subyacente a este fenómeno está relacionado con una desregulación de la maquinaria celular responsable del proceso de splicing (componentes del spliceosoma y factores de splicing). Por ello, en este proyecto se analizaron los niveles de expresión de un conjunto representativo de componentes del spliceosoma (n=15) y factores de splicing (n=27) en dos cohortes de muestras de CaP: 1) muestras de CaP clínicamente localizadas (n=84) y su respectivo tejido adyacente no tumoral (n=84); y, 2) muestras de biopsias de CaP agresivo (n=42). Nuestros resultados reflejaron una profunda desregulación en el nivel de expresión de multitud de componentes de la maquinaria de splicing (i.e. 7 componentes del spliceosoma y 19 factores de splicing) al comparar muestras de CaP frente a las correspondientes regiones adyacentes no tumorales. Además, la sobreexpresión de SNRNP200, SRRM1 y SRSF3 (a nivel de ARNm y proteína) se asoció con relevantes parámetros clínicos (p.ej.: grado Gleason, estadio tumoral, presencia de metástasis, recidiva bioquímica) y moleculares (p.ej.: expresión de AR-v7) de agresividad tumoral en muestras de CaP. A su vez, se llevaron a cabo ensayos funcionales (proliferación/migración celular) y mecanísticos [análisis de la expresión génica (PCR cuantitativa) y proteica (Western-blot)] en líneas celulares derivadas de próstata normal (PNT2) y tumoral (22Rv1, LNCaP, DU145 y PC-3) en respuesta al silenciamiento de SNRNP200, SRRM1 y SRSF3. Estos análisis revelaron un descenso en la tasa de proliferación/migración de células de CaP a través de la modulación de los niveles de expresión de variantes de splicing oncogénicas (p.ej.: AR-v7, PKM2, XBP1-S), así como de una alteración de rutas de señalización oncogénicas (p.ej.: p-AKT, p-JNK) claves en el desarrollo y/o agresividad del CaP. En conjunto, nuestros resultados demuestran que la maquinaria de splicing se encuentra drásticamente alterada en CaP, donde SNRNP200, SRRM1 y SRSF3 podrían representar nuevas dianas para el diagnóstico/pronóstico y tratamiento del CaP y CPRC.