Diagnóstico Preclínico de Scrapie mediante inmunohistoquímica

Abstract

El scrapie clásico producido por priones, es una enfermedad neurodegenerativa fatal que afecta a ovinos y caprinos, caracterizada por presentar un largo periodo de incubación, posterior a lo cual es posible el diagnóstico con la aparición gradual de los signos clínicos y las alteraciones neurológicas. La principal vía de transmisión entre los animales es la oral. En Chile el scrapie no ha sido descrito, por tanto, al tratarse de una región con baja probabilidad de encontrar animales enfermos, los sistemas de vigilancia para esta enfermad son de tipo pasivo, acotándose al muestreo post mortem de cierto número de animales, principalmente los que muestran sintomatología clínica compatible. Para esto se cuenta con herramientas diagnósticas como son la histopatológica tradicional y la inmunohistoquímica (IHQ). El gran inconveniente es que se utilizan muestras de cerebro, por lo que éstas deben ser obtenidas post mortem. Este hecho impide detectar la enfermedad en animales que pueden estar incubándola sin presentar la sintomatología, impidiendo así su manejo adecuado. En este trabajo se analizó, implementó, aplicó y validó un método para detectar scrapie clásico en su etapa preclínica, utilizando la IHQ en muestras de tejido linfoide, tanto del tercer párpado como de la mucosa rectal de ovinos. De acuerdo con lo descrito, esta técnica permitiría realizar el diagnóstico en la fase preclínica de la enfermedad en poblaciones ovinas amplias, permitiendo realizar el diagnóstico en animales vivos y desarrollar estudios conducentes a establecer un estado comprobable del scrapie en la masa ovina nacional. Por una parte, se obtuvieron y procesaron 86 muestras de tercer párpado de ovinos nacionales, 44 obtenidos de mataderos y 42 procedentes de animales con sintomatología nerviosa compatible con scrapie. Por otra parte, se analizaron 100 muestras de mucosa rectal distal de ovinos de mataderos, todos ellos entre los 2 a 4 años de edad. Además se utilizaron muestras ciegas de validación, 14 de tercer párpado y 12 de mucosa rectal, con sus respectivos...

The classical scrapie produced by prion is a fatal neurodegenerative disease that affects sheep and goats, characterized by a long incubation period, after which the diagnosis is possible with the gradual onset of clinical signs and neurological disorders. The main route of transmission between animals is oral. In Chile scrapie has not been described, therefore, being a region with low probability of finding sick animals. Surveillance programs for this disease are passive using postmortem sampling of a number of animals, mainly those showing clinical signs compatible with the disease. The main diagnostic tools are traditional histopathological and immunohistochemistry (IHC). The big drawback is that brain samples are used, so they must be obtained post mortem, which does not allow to detect the disease in life animals that may be incubating the disease and that do not show clinical signs, and their proper handling. In the present work we analyzed, implemented, applied and validated a method for detecting classical scrapie in the preclinical stage, using IHC in lymphoid tissue samples from both the third eyelid and the rectal mucosa of sheep. According to the description, this technique would make the diagnosis in the preclinical phase of the disease in large sheep populations, allowing the diagnosis in live animals and conduct studies to establish a state conducive verifiable sheep scrapie in the National sheep population. In a first step, were obtained and processed 86 samples from domestic sheep third eyelid, 44 and 42 obtained from slaughterhouses and from animals with nervous signs compatible with scrapie. Moreover, 100 samples from distal rectal mucosa of sheep slaughterhouses, all of them 2 to 4 year-old were analyzed. Furthermore 14 blind samples from third eyelid and 12 from rectal mucosa, with their respective obex were used for validation purposes. 37 samples from sheep obex provided by a Reference Centre (RC) were used as positive and negative controls for the IHC...