Iniciación de la caracterización de Interactoma de la GTPasa Rab 18

Abstract

Estudios previos han establecido que las Rab GTPasas funcionan como proteínas que aseguran la eficiencia y especificidad de la selección del cargo, la dirección del movimiento de las vesículas y su fusión con las membranas aceptoras dentro de la ruta de secreción regulada. En concreto, nuestro laboratorio ha demostrado que Rab18 se une a gránulos de secreción e impide su movimiento hacia la membrana plasmática en respuesta a estímulos extracelulares. Además, estudios de doble híbrido de levadura han mostrado que Rab18 puede interaccionar con los componentes de BLOC1 (pallidin y dysbindin-II), complejo multiproteico que participa en la biogénesis de lisosomas y otros orgánulos relacionados con la ruta endolisosomal. En este trabajo se han llevado a cabo diversas aproximaciones experimentales encaminadas a profundizar en el significado biológico de la interacción de Rab18 con los gránulos de secreción, así como a confirmar su posible interacción con componentes del complejo BLOC1, pallidin y dysbindin-II, en células de feocromocitoma de rata PC12 mediante microscopía confocal. Así, encontramos que existe una relación espacial entre Rab18 y los componentes estudiados del complejo BLOC1. Por otra parte, demostramos que la asociación de Rab18 a sus gránulos diana depende de la red de microtúbulos, ya que se inhibió tras el tratamiento de las células con un agente despolimerizador de microtúbulos (nocodazol), sin que éste afectara a la biogénesis de los gránulos de secreción. Estos hallazgos sugieren que Rab18 se asocia a gránulos de secreción en un proceso dependiente de microtúbulos, o proteínas asociadas a éstos. Por otra parte, su interacción con componentes del complejo BLOC1 sugiere que Rab18 podría facilitar la clasificación y/o empaquetamiento de enzimas lisosomales incluidas en gránulos de secreción recién formados para su transporte selectivo hacia el sistema endolisosomal.