Uso de la inmunohistoquímica para la búsqueda de proteínas priónicas en tercer párpado de ovinos en Chile

Abstract

An immunohistochemstry (IHC) method to detect scrapie in sheep third eyelid lymphoid tissue was applied in post mortem animals. This method would allow to carry out the diagnosis in Chile, including the preclinical phase of the disease in sheep flock. Eighty samples from two year old sheep were obtained. Fourty two showed neurological signs consistent with scrapie and thirty eight came from slaughterhouse. Another thirteen blind samples were provided by a Reference Center (RC) in addition to sixteen obex used as controls. Samples were evaluated in sections with hematoxilin-eosin and classified as suitable if presenting at least four lymphoid follicles in the tissue. Based on this, seventy four out of ninety samples were considered suitable. The IHC results showed that all samples were negative to scrapie and only seven provided by the RC were positive. All obex samples were positive to immunostaining by PrPSc, unlike negative controls. The results demosntrate that this diagnostic tool may be considered for monitoring the sanitary condition related to scrapie in the ovine flock in Chile.

En este trabajo se implementó y aplicó un método para detectar el scrapie, utilizando la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) en tejido linfoide de tercer párpado ovino. Este método permitiría realizar el diagnóstico en animales vivos, incluso en fases preclínicas de esta enfermedad en la masa ovina nacional. Se obtuvieron y procesaron 80 muestras de tercer párpado de ovinos nacionales mayores de 2 años, 42 con sintomatología nerviosa compatible con scrapie y 38 que fueron obtenidos de mataderos. Otras 13 muestras ciegas de validación de tercer párpado y sus respectivos óbex, además de 16 muestras de óbex utilizadas como controles, fueron aportadas por un Centro de Referencia (CR). Las muestras fueron evaluadas en cortes teñidos con Hematoxilina-Eosina y clasificadas como aptas cuando presentaban al menos 4 folículos linfoides en el tejido obtenido. Sobre esta base, 74 de las 93 muestras totales de tercer párpado fueron consideradas como aptas. Los resultados de IHQ mostraron que todas las muestras nacionales fueron negativas a scrapie y sólo 7 de las proporcionadas por el CR fueron positivas. Además, en todos los controles positivos de óbex se observó inmunomarcaje de PrPSc, lo cual no se evidenció en los controles negativos. Los resultados descritos anteriormente permiten demostrar la aplicabilidad y capacidad para utilizar esta herramienta diagnóstica en la masa ovina, lo cual permitiría establecer la condición del país respecto al scrapie y obtener los beneficios de esta situación sanitaria.