Monitoring base excision repair in Chlamydomonas reinhardtii cell extracts. DNA Repair

Abstract

La reparación por escisión de bases (BER) es una vía de defensa importante contra el daño espontáneo del ADN. Este proceso en múltiples pasos es iniciado por ADN glicosilasas que reconocen y escinden la base dañada, y continúa con la acción concertada de proteínas adicionales que realizan la incisión del sitio abásico, el rellenado del hueco y la ligación. El BER ha sido estudiado extensamente en bacterias, levaduras y animales. Aunque el conocimiento de esta vía en plantas terrestres está aumentando, no hay informes que detecten la BER en algas. Describimos aquí un sistema experimental in vitro que permite el análisis específico de la BER en el alga modelo Chlamydomonas reinhardtii. Mostramos que los extractos celulares de C. reinhardtii contienen la maquinaria enzimática necesaria para llevar a cabo la reparación BER de lesiones comunes en el ADN, como uracilo y sitios abásicos. Nuestros resultados también revelan que la reparación puede ocurrir tanto mediante la inserción de un solo nucleótido como mediante la síntesis de ADN de parche largo.