Selección de genes de referencia y análisis de expresión diferencial en semen equino criopreservado

Abstract

La creación de bancos de germoplasma es una necesidad para realizar planes más dinámicos de selección de reproductores, siendo necesario abordar los estudios de calidad seminal desde diferentes puntos de vista. Un criterio de calidad seminal puede basarse en las diferencias de transcripción de algunos genes implicados en la espermatogénesis y la maduración espermática, que afectan a características seminales tan importantes como la motilidad progresiva y la fragmentación del ADN espermático. El espermatozoide maduro no tienen función de transcripción porque carece de ribosomas, a excepción de los intramitocondriales, y hace pensar que la pequeña cantidad de ARN que persiste en estas células es un reflejo de lo ocurrido en las etapas anteriores, lo que nos puede dar mucha información sobre alteraciones durante la espermatogénesis o marcadores de calidad seminal antes de una evaluación in vivo, además estos ARN pueden tener trascendencia en los inicios de la expresión del óvulo fecundado. Por otro lado, es importante poder trabajar con semen congelado, pues no siempre los sementales son accesibles para una extracción de semen fresco. Como primer paso en los estudios de expresión genética, es necesario definir genes de referencia estables. En este trabajo se analizan nueve genes candidatos, beta-actina (ACTB), ATP sintasa subunidad b (ATP5B), gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), proteína de choque térmico (HSP90), histona subunidad 2AI (H2AI), protamina 1 (PRM1) proteína ribosomal L32 (RPL32), succinato deshidrogenasa (SDHA) y ubiquitina (UBQ). Los genes RPL32, ACTB y ATP5b exhiben el mejor comportamiento y estabilidad, por lo que son los genes de referencia más adecuados para usar en estudios con espermatozoides vivos post-descongelación en équidos. Además, se ha detectado la existencia de relaciones entre los diferentes genes estudiados con parámetros de calidad seminal. El gen SDHA está infraexpresado en espermatozoides con baja motilidad progresiva; el gen UBQ está sobreexpresado en espermatozoides con peor movimiento de linealidad y rectitud; el gen PRM1 está infraexpresado en espermatozoides con alta fragmentación a las 0 y 4 horas postdescongelación; y el gen GAPDH está infraexpresado en espermatozoides con alta fragmentación a las 0 y 6 horas postdescongelación.