Evaluación de Genotype Mycobacterium Direct, nueva técnica genética de microbiología molecular en la detección de M. tuberculosis Complex y otras micobacterias atípicas en muestras de interés clínico

Abstract

Nuestro objetivo es evaluar una nueva técnica genética, GENOTYPE MYCOBACTERIUM DIRECT (GTMD), basado en la tecnología NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification) que nos permite mediante la amplificación de 23S rARN, la detección de M.tuberculosis Complex, M.avium, M,intracellulare, M.kansasii, y M.malamoense directamente de los especímenes clínicos se analizaron 186 muestras respiratorias y extrapulmonares, procedentes de 89 pacientes sospechosos de padecer tuberculosis u otro tipo de micobacteriosis. Esta técnica se divide en tres partes: 1,- Estabilización y el aislamiento de ARNr. 2,- Amplificación isotérmica del ARN mediante NASBA, a 41ºC. 3,- Detección del producto amplificado mediante hibridación reversa sobre membrana de nitrocelulosa. De las 186 muestras totales, 138 dieron cultivo positivo para micobacterias. En 130 muestras se obtuvo crecimiento para M.tuberculosis Complex. Las muestras restantes fueron positivas para M.intracellulare (3), M.malmoense (1), M.kansasii (1) y M.avium (3) GTMD detectó un total de 135 muestras positivas. De éstas, 14 muestras fueron positivas donde el cultivo de micobacterias fue negativo. Esto indica una sensibilidad, especificidad, VPP y VPN de GTMD respecto al cultivo del 88%, 71%, 91% y 74% respectivamente. Para el análisis de las discrepancias encontradas (resultados GTMD positivos como cultivo negativo) se consideró un verdadero positivo para la técnica de amplificación cuando los pacientes era sospechosos de padecer tuberculosis pulmonar activa tras una revisión de la historia clínica, respondieron al tratamiento antituberculoso o el paciente tuvo algún, cultivo positivo en los últimos 6 meses anteriores al estudio. Las 14 muestras fueron consideradas como verdaderos positivos, resultando la sensibilidad, especificidad, VPP y VPN al 88%, 100% y 63% respectivamente.